产品货号:
MT2503
中文名称:
RT-LAMP扩增试剂盒(SYBR荧光染料法)
英文名称:
SYBR RT-LAMP Kit
产品规格:
100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒是专为RNA样本的LAMP扩增反应设计,制品中Bst4.0+ DNA Polymerase中包含Bst2.0 DNA聚合酶、极其耐热的反转录酶、RNase Inhibitor,在RNA的LAMP扩增中无需再加入任何其它酶制品即可用于RNA的LAMP扩增。除此外,Bst4.0+ DNA Polymerase中不含有甘油成分,因此可用于建立LAMP引物mix与酶制品的冻干品,以提高LAMP检测制品的稳定性和易用性。本试剂盒包含SYBR Green染料用于实时荧光检测。
组分 | 规格 |
Bst4.0+ Polymerase | 250μL |
2×SYBR IsoAmp Buffer | 1mL |
保存:-20℃,避免反复冻融,有效期2年。短期使用请置于4℃可稳定保存3个月。
2.5μL Bst4.0+ Polymerase包含8U Bst2.0 DNA聚合酶、20U耐热反转录酶、8U RNase抑制剂、22%海藻糖。本制品不含甘油,可用于冻干。
- 对成功建立LAMP检测方法至关重要的四个参数分别是:引物位置、引物使用浓度、反应温度(60~65℃)和反应时间。引物使用浓度、反应温度是优先要确认的参数,如经过参数调整后仍不能达到检测用标准,则重新设计引物组合,再进行测试。
- 在用于其它恒温扩增反应时(如CPA、SMAP等),可参考如上策略进行使用,反应时间可能会需要调整。
- 关于矿物油的使用,在配制完LAMP反应体系后,可加入一滴矿物油覆盖于反应液上部,以减少气溶胶的污染。
- 在0.2mL EP反应管中加入下述试剂配制RT-LAMP反应体系
成分 用量 2×SYBR IsoAmp Buffer 10μL Bst4.0+ Polymerase 2.5μL 10×LAMP Primer Mix 2μL 模板RNA X μL ddH2O 至20μL - 10×LAMP Primer Mix浓度:FIP/BIP 16μM each、LoopF/B 4μM each、F3/B3 2μM each。
- 使用定量PCR仪进行LAMP扩增程序:
步骤1:60℃ 10s
步骤2:60℃ 50s收集信号,循环25次
总反应时间为25min。
图1.以SARS-CoV-2体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、104和106Copy,NTC为ddH2O为模板。上图为加样结束反应起始前,下图为65℃反应26min后。
关于制品冻干:
- 引物及酶制品的冻干(可参考)
将该制品进行冻干处理,获得冻干品。成分 用量 Bst4.0+ DNA Polymerase 2.5μL 10×LAMP Primer 2μL 45%海藻糖 0.5μL 总体积 5μL - 冻干制品的LAMP扩增
向一份冻干品中加入10μL的2×SYBR IsoAmp Buffer溶解冻干制品,并加入最多10μL的检测RNA模板,总体积为20μL。进行LAMP扩增。
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